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更新時間：2019-12-17
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乳酸含量（lactic acid ，LA ）試劑盒說明書可見分光光度法
規(guī)格：50管/24樣
注意：正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
測定意義
乳酸是生物體代謝過程中重要的中間產(chǎn)物，與糖代謝、脂類代謝、蛋白質(zhì)代謝及細胞內(nèi)能量代謝密切相關(guān)，乳酸含量是評估糖元代謝的和有氧代謝的重要指標。
測定原理
乳酸在乳酸脫氫酶的作用下生成丙酮酸，同時使NAD+還原生成NADH和H+，H+傳遞給PMS生成的PMSH2還原INT生成紅色物質(zhì)，在530nm處有特征吸收峰。
自備實驗用品及儀器
天平、研缽、離心機、可見分光光度計、1mL玻璃比色皿、恒溫水浴鍋。
試劑組成和配制
提取液：液體 55mL×1 瓶，4℃保存。
試劑一：液體 8mL×1 瓶，4℃保存。
試劑二：液體 12mL×1 瓶，4℃保存。
試劑三：粉劑×1 支，-20℃避光保存。臨用前加入1.2mL蒸餾水充分溶解。
試劑四：粉劑×1 瓶，4℃避光保存。臨用前加12mL蒸餾水充分溶解。
試劑五：粉劑×1 支，4℃避光保存。
標準品：液體 1mL×1 支，4℃保存。
顯色液：臨用前根據(jù)用量按照提取液（V）：試劑三（V）：試劑四（V）：試劑五（m）=1：
0.3：3：15（mg）的比例充分混勻。
樣本處理
1. 組織：按照質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g，加入1mL提取液）加入提取液，冰浴勻漿后于4℃，12000g離心10min，取上清測定。
2. 細胞：按照細胞數(shù)量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；于 4℃，12000g 離心10min，取上清測定。
3. 血清：直接測定。
測定操作
| 空白管 | 樣品對照管 | 樣品測定管 | 標準對照管 | 標準測定管 |
樣品（μL） |
| 50 | 50 |
|
|
標準品（μL） |
|
|
| 50 | 50 |
H2O（μL） | 500 | 300 | 450 | 300 | 450 |
試劑一（μL） |
| 150 |
| 150 |
|
試劑二（μL） | 200 | 200 | 200 | 200 | 200 |
顯色液（μL） | 300 | 300 | 300 | 300 | 300 |
充分混勻，于 37℃反應(yīng) 30min，于 1mL 玻璃比色皿，空白管調(diào)零，測定 530nm 處吸光值， 分別記為 A1，A2，A3，A4，△A 樣=A2-A1；△A 標= A4-A3 | |||||
測定操作
注意：空白管、標準對照管和標準測定管只需測定一次
計算公式
1. 按照蛋白含量計算
LA 含量（μmol/mg prot）=△A 樣÷△A 標×C 標÷ Cpr
=2×△A 樣÷△A 標÷ Cpr
2. 按照樣本質(zhì)量計算
LA 含量（μmol/g）=△A 樣÷△A 標×C 標÷ W
=2×△A 樣÷△A 標÷ W
3. 按照細胞數(shù)量計算
LA 含量（μmol/104cell）=△A 樣÷△A 標×C 標÷ 細胞數(shù)量
=2×△A 樣÷△A 標÷ 細胞數(shù)量
4. 按照液體體積計算
LA 含量（μmol/mL）=△A 樣÷△A 標×C 標
=2×△A 樣÷△A 標
C 標：標準品濃度，2mmol/L ；W：樣本質(zhì)量，g/mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL
注意事項
1. 空白管、標準對照管、標準測定管只需做一次。
2. 若吸光值超過 1.2，請進行適當?shù)南♂尯笤龠M行測定，并在計算公式中乘以稀釋倍數(shù)。
3. 低檢出限為 1.8μmol/L。數(shù)，500 萬。
當前位置：
