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更新時(shí)間：2020-09-14
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腺苷脫氨酶(ADA)檢測試劑盒(波氏微板法)
腺苷脫氨酶(Adenosine Deaminase，ADA)是嘌呤核苷代謝中重要的酶類，屬于一種巰基酶，每分子至少含 2 個(gè)活性巰基，ADA 能催化腺嘌呤核苷轉(zhuǎn)變?yōu)榇吸S嘌呤核苷，再經(jīng)核苷磷酸化酶作用生成次黃嘌呤，其代謝緩和終產(chǎn)物為尿酸，廣泛分布于人體各組織中，以 胸腺、脾和其他淋巴組織中含量高，而肝、肺、腎和骨胳肌等含量低。
腺苷脫氨酶(ADA)檢測試劑盒(波氏比色法)其檢測原理是待測樣品中的 ADA 催化腺嘌呤核苷水解脫氨，產(chǎn)生次黃嘌呤核苷和銨離子，利用波氏顯色法測定氨離子生成量， 其反應(yīng)公式為：腺苷+H2O→次黃嘌呤+NH3，通過分光光度法(酶標(biāo)儀)測定 640nm 處吸光度，根據(jù)計(jì)算公式可得 ADA 活力，100T 試劑盒可測 50~55 個(gè)樣品。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不宜用于臨床診斷或其他用途。
產(chǎn)品組成：
編號(hào) 名稱 | JSK0231 100T | Storage |
試劑(A): 氨氮標(biāo)準(zhǔn)(1mg/ml) | 1ml | 4℃ |
試劑(B): 底物緩沖液 | 1.5ml | 4℃ |
試劑(C): 波氏 ADA 顯色液 | 15ml | 4℃ 避 光 |
試劑(D): ADA Assay buffer | 15ml | 4℃ 避 光 |
試劑(E): ddH2O | 50ml | RT |
使用說明書 |
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自備材料：
1、離心管或小試管
2、水浴鍋
3、96 孔板
4、酶標(biāo)儀
操作步驟(僅供參考)：
1、準(zhǔn)備樣品：
①血漿、血清樣品：血漿、血清按照常規(guī)方法制備，可以直接用于本試劑盒的測定，-20℃ 凍存，用于 ADA 的測定。
②細(xì)胞或組織樣品：取恰當(dāng)細(xì)胞或組織進(jìn)行勻漿，低速離心取上清，-20℃凍存，用于 ADA
的測定。
③高活性樣品：如果樣品中含有較高活性的 ADA，可以使用 ddH2O 稀釋。
④(選做)樣品準(zhǔn)備完畢后可以用 BCA 蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度，以便于后續(xù)計(jì)算單位蛋白重量組織或細(xì)胞內(nèi)的 ADA 含量。
2、稀釋標(biāo)準(zhǔn)品：用 ddH2O 準(zhǔn)確稀釋氨氮標(biāo)準(zhǔn)(1mg/ml)至 25μg/ml，即為氨氮標(biāo)準(zhǔn)工作液，4℃保存?zhèn)溆谩?/span>
3、ADA 加樣：按照下表設(shè)置空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、對照孔、測定孔，溶液應(yīng)按照順序依次加入，并注意避免產(chǎn)生氣泡。如果樣品中的酶活性過高，可以減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后 再進(jìn)行測定。
加入物(μl) | 空白孔 | 標(biāo)準(zhǔn)孔 | 對照孔 | 測定孔 |
ddH2O | 5 | — | — | — |
氨氮標(biāo)準(zhǔn)工作液(25μg/ml) | — | 5 | — | — |
待測樣品(如血清等) | — | — | 5 | 5 |
底物緩沖液 | 12.5 | 12.5 | — | 12.5 |
混勻，37℃準(zhǔn)確水浴 60min。 | ||||
底物緩沖液(ml) | — | — | 12.5 | — |
波氏 ADA 顯色液 | 125 | 125 | 125 | 125 |
ADA Assay buffer | 125 | 125 | 125 | 125 |
混勻，37℃水浴顯色 30min。 | ||||
4、ADA 測定：以 ddH2O 調(diào)零，酶標(biāo)儀 640nm 處測定吸光度(分別為 A空白、A對照、A標(biāo)
準(zhǔn)、A測定)。
ADA 活性單位的定義：在 37℃ 1ml 血清中 ADA 1h 催化底物產(chǎn)生 1μg 氨氮為一個(gè)ADA 酶活力單位。
血清、血漿中 ADA 活力(U/L)=(A測定-A對照)/(A標(biāo)準(zhǔn)-A空白)×25
組織中 ADA 活力(U/mg)=[(A測定-A對照)/(A標(biāo)準(zhǔn)-A空白)×25]/待測樣品的蛋白濃度(mg/ml) 式中：
A測定=測定孔的吸光度
A對照=對照孔的吸光度
A標(biāo)準(zhǔn)=標(biāo)準(zhǔn)孔的吸光度
A空白=空白孔的吸光度
注意事項(xiàng)：
1、 稀釋樣品和研磨樣品所用水，均應(yīng)為 ddH2O，不可為普通的水。
2、 如果采用單位，需在測得活力單位基礎(chǔ)上乘以 1.19。
3、 如果沒有酶標(biāo)儀，也可用分光光度計(jì)測定，但應(yīng)注意加入試劑量不同，相應(yīng)的檢測次數(shù)會(huì)大大減少。
4、 采用分光光度計(jì)未調(diào)零情況下，Leagene 空白參考范圍在 0.05~0.09 之間，25μg/ml 標(biāo)準(zhǔn)參考范圍在 0.13~0.18 之間，由于儀器設(shè)備、操作方法以及工作環(huán)境不同，參考范圍會(huì)有差異。
5、 該試劑盒測定下限在 2~5μg/ml 之間，測定上限在 70~90μg/ml 之間；從肉眼觀察， 一般情況下濃度在 15~30μg/ml 即可顯淡藍(lán)色；濃度≤15μg/ml 可顯淡黃色；濃度
≥30μg/ml 可顯藍(lán)色，一般情況下接近上限比接近下限更準(zhǔn)確。
6、 胸水標(biāo)本經(jīng)離心后取上清，置于 4℃保存?zhèn)溆?，ADA 活性可穩(wěn)定 1 周。
7、 血清樣本應(yīng)避免溶血，4℃保存 3 天。
有效期：6 個(gè)月有效。4℃運(yùn)輸，4℃保存。
當(dāng)前位置：
