層析柱是凝膠層析技術(shù)中的主體,一般用玻璃管或有機玻璃管。凝膠過濾層析是利用一定大小孔隙的具有網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠作層析介質(zhì)(如葡聚糖凝膠、瓊脂糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠等),根據(jù)被分離物質(zhì)的分子大小、形狀不同擴散到凝膠孔隙內(nèi)的速度不同,因而通過層析柱的快慢不同而分離的一種層析法。
所有的層析系統(tǒng)都由兩個相組成:一是固定相,它或者是固體物質(zhì)或者是固定于固體物質(zhì)上的成分;另一是流動相,即可以流動的物質(zhì),如水和各種溶媒。適用于分子篩、離子交換、凝膠滲透與親和層析。隨著液相層析法進入血液制品生產(chǎn),利用層析法,可純化血漿中多種蛋白,例如白蛋白等等。
層析柱的使用注意事項:
1、除氯化的碳氫化合物(二氯乙烷、三氯甲烷)。丙酮、酮類化合物、脂肪族脂和苯酚之外,其他的所有有機溶劑均可適用。
2、膠要洗干凈,如果柱子里面殘留蛋白的話,在混勻過程中會產(chǎn)生大量氣泡,影響柱效。
3、禁止使用濃度大于10%的氫氧化鈉,10%的鹽酸或5%的醋酸溶液,因上述溶液會損壞尼龍網(wǎng)篩。
4、柱子一定要垂直,做重錘線,然后裝柱器上端氣泡一定要排除,如不排除那么水流就不是均一的。
5、裝柱前上下兩端氣泡一定要先排盡,下端要先用水潤一下防止在加膠過程產(chǎn)生氣泡。
6、沉降過程不要太長(半小時足矣),膠在使用多次后有些膠顆粒已經(jīng)失效,大小已經(jīng)不是均一的,所以如果放任讓其自由沉降太長,整個柱子就不是均一的。