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增強(qiáng)革蘭氏染色液說(shuō)明書

更新時(shí)間:2021-05-17點(diǎn)擊次數(shù):882

   產(chǎn)品簡(jiǎn)介:

革蘭氏染色法是丹麥醫(yī)生Christain Gram  1884 年所發(fā)明,是細(xì)菌學(xué)中廣泛使用的一種鑒別染色法,亦是一種復(fù)染法。未經(jīng)染色的細(xì)菌,由于其與周圍環(huán)境折光率差別甚小, 故在顯微鏡下極難觀察。染色后細(xì)菌與環(huán)境形成鮮明對(duì)比,可以清楚地觀察到細(xì)菌的形態(tài)、排列及某些結(jié)構(gòu)特征,用以分類鑒定。通過(guò)此法染色可將細(xì)菌鑒別為革蘭陽(yáng)性菌(G+)和革蘭  陰性菌(G-)兩大類。細(xì)菌的不同顯色反應(yīng)是由于細(xì)胞壁對(duì)乙醇的通透性和抗脫色能力的差異, 主要是肽聚糖層厚度和結(jié)構(gòu)決定的。經(jīng)結(jié)晶紫染色的細(xì)胞用碘液處理后形成不溶性復(fù)合物, 乙醇能使它脫色。在革蘭陰性細(xì)胞染色中,乙醇或丙酮破壞了胞壁外膜、損傷肽聚糖層和細(xì)  胞質(zhì)膜,結(jié)晶紫和碘復(fù)合物從細(xì)胞中滲漏出來(lái),當(dāng)再用其他染色液復(fù)染時(shí),顯現(xiàn)紅色。紅色  染料雖然也能進(jìn)入已染成紫色的 G+細(xì)胞,但被紫色蓋沒(méi),所以紅色顯示不出來(lái)。在革蘭陽(yáng)性細(xì)胞染色中,乙醇還能使厚的肽聚糖層脫水,導(dǎo)致孔隙變小,由于結(jié)晶紫和碘復(fù)合物分子  大,不能通過(guò)細(xì)胞壁,不易脫色,所以保持著紫色。

Enhanced Gramˊs stain 采用經(jīng)典的革蘭染色配方進(jìn)一步改進(jìn),使用復(fù)紅復(fù)染液替代沙黃染色液,增強(qiáng)了染色效率,用于極難染色的細(xì)菌。臨床標(biāo)本直接涂片,背景干凈,胞核胞質(zhì)對(duì)比強(qiáng)烈,胞內(nèi)吞噬體清晰易辨認(rèn),細(xì)菌染色特征典型。

產(chǎn)品組成:

 

   自備材料:

1、接種環(huán)或挑取細(xì)菌的其他工具

2、酒精燈

3、載玻片

4、光學(xué)顯微鏡

   操作步驟(僅供參考)

1、涂片:取待檢細(xì)菌,于載玻片中央涂成薄層或者或在載玻片上滴加少許無(wú)菌水,取菌與的水混合均勻,涂成一薄層。

2、干燥:涂片后在室溫下自然干燥,也可在酒精燈上略加溫,使之迅速干燥。

3、固定:手持載玻片一端,標(biāo)本面朝上,在酒精燈的火焰外側(cè)快速來(lái)回移動(dòng) 3~5 次,每 1s,溫度不宜過(guò)高,防止菌體蛋白變性,放置待涼后染色。也可以用甲醇或乙醇固定。

4、初染:滴加結(jié)晶紫染色液染色 1~2min,清水沖洗去染色液。

5、媒染:滴加 Gram 碘液,并覆蓋載玻片,室溫放置 1~2min,水洗。

6、脫色:滴加脫色液,搖動(dòng) 10~30s,直至流下的脫色液不出現(xiàn)紫色時(shí)為止,立即用水沖去脫色液,終止反應(yīng)。

7、復(fù)染:滴加復(fù)紅復(fù)染液染色 30~60s,水洗。

8、干燥。鏡檢:置油鏡觀察。

  

  染色結(jié)果:

             革蘭氏陽(yáng)性菌             藍(lán)色至紫色

       革蘭氏陰性菌               紅色

注意事項(xiàng):

1、涂片之前,應(yīng)事先在背面做好圓圈標(biāo)記,以便判斷后續(xù)試驗(yàn)的位置。

2、取細(xì)菌時(shí),應(yīng)注意自我防護(hù),拔或塞試管塞時(shí),應(yīng)將試管口通過(guò)火焰略加燒灼,最后將接種環(huán)在火焰上燒灼滅菌。

3、加熱固定涂片時(shí),應(yīng)注意玻片勿太靠近火焰,一般要求玻片溫度不超過(guò) 60℃,以玻片背面觸及手背皮膚不覺(jué)過(guò)燙為宜。

4、革蘭氏染色的關(guān)鍵在于嚴(yán)格掌握脫色程度,脫色時(shí)間應(yīng)根據(jù)經(jīng)驗(yàn)判斷。脫色過(guò)度,陽(yáng)性菌可被誤染為陰性菌;脫色不夠,陰性菌可被誤染為陽(yáng)性菌。

5、待檢細(xì)菌培養(yǎng)時(shí)間會(huì)影響染色,陽(yáng)性菌培養(yǎng)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或已死亡或細(xì)菌溶解,常呈陰性。

 

 

有效期: 12 個(gè)月有效。