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更新時(shí)間：2021-10-15
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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
核酸(nucleic acid)是由許多核苷酸聚合成的生物大分子化合物，是生命的基本物質(zhì)之一，廣泛存在于所有動(dòng)植物細(xì)胞、微生物體內(nèi)，根據(jù)化學(xué)組成不同，核酸可分為脫氧核糖核酸(簡(jiǎn)稱DNA)和核糖核酸(簡(jiǎn)稱RNA)，核酸分子中含有一定比例的磷，DNA中磷含量為9.2%，RNA中磷含量為9.0%
核酸檢測(cè)試劑盒(定磷比色法)檢測(cè)原理是在強(qiáng)酸條件下，核酸分子中的有機(jī)磷轉(zhuǎn)化為無機(jī)磷，后者與鉬酸銨形成黃色的磷鉬酸銨，隨后還原劑把高價(jià)鉬離子還原成低價(jià)鉬離子，進(jìn)而形成藍(lán)色的鉬藍(lán)，在一定濃度范圍藍(lán)色深淺與磷含量成正比，通過分光光度計(jì)在660nm 處檢測(cè)吸光度，通過檢查標(biāo)準(zhǔn)曲線，獲得磷含量，如果待測(cè)樣品中有無機(jī)磷，應(yīng)予以扣除，否則結(jié)果偏高。本試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不宜用于臨床診斷或其他用途。
產(chǎn)品組成：
名稱 | 規(guī)格 50T | Storage | |
試劑(A): 磷標(biāo)準(zhǔn)(1mg/ml) | 1ml | 4℃ | |
試劑(B): 玻璃珠 | 50 粒 | RT 避 光 | |
試劑(C): H2O2 | 2×1ml | RT | |
試劑(D): 定磷試劑 | D1：定磷試劑 A | 50ml | RT |
D2：定磷試劑 B | 20ml | RT | |
D3：定磷試劑 C | 20ml | 4℃ 避 光 | |
臨用前，按 D1：D2：D3=3：1：1 混合，配制定磷試劑，即配即用。 | |||
使用說明書 | 1 份 | ||
自備材料：
1、蒸餾水、濃硫酸
2、離心管或試管
3、容量瓶
4、凱氏燒瓶
5、水浴鍋
6、比色杯、分光光度計(jì)
操作步驟(僅供參考)：
1、稀釋標(biāo)準(zhǔn)品：取適量的磷標(biāo)準(zhǔn)(1mg/ml)，按磷標(biāo)準(zhǔn)(1mg/ml)：蒸餾水=1：49 的比例
稀釋標(biāo)準(zhǔn)品至 20μg/ml。取干凈離心管或試管，按下表進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)品濃度的依次稀釋，獲得不同濃度的多個(gè)磷標(biāo)準(zhǔn)。
0 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | |
磷標(biāo)準(zhǔn)(20μg/ml)/ml | 0 | 0.025 | 0.05 | 0.1 | 0.15 | 0.2 | 0.25 | 0.3 | 0.35 |
蒸餾水/ml | 1.5 | 1.475 | 1.45 | 1.4 | 1.35 | 1.3 | 1.25 | 1.2 | 1.15 |
磷含量/μg | 0 | 0.5 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 |
2、制備待測(cè)樣液：取樣品(如核酸粗提物)0.05g，加入少量蒸餾水溶解（如果難以溶解，可滴加樣品處理液至溶液 pH=7.0），準(zhǔn)確定容至 25ml(此溶液樣品含量 2mg/ml)，即為待測(cè)樣液。
3、制備總磷測(cè)定液：取上述待測(cè)樣液(2mg/ml)1ml，置于 50ml 凱氏燒瓶，加入 1ml 濃硫酸和 1 粒玻璃珠，凱氏燒瓶?jī)?nèi)插入一個(gè)小漏斗，放在通風(fēng)櫥內(nèi)加熱至溶液呈黃色時(shí)取出，稍冷卻后加入 2～3 滴 H2O2，繼續(xù)消化至透明，表示消化完成。冷卻，轉(zhuǎn)移消化液至 100ml 容量瓶中，用少量蒸餾水洗滌凱氏燒瓶 2 次，洗滌液一并倒入容量瓶，加蒸餾水定容至 100ml，混勻后待用，即為總磷測(cè)定液。
4、無機(jī)磷測(cè)定液(選做)：取上述待測(cè)樣液(2mg/ml)1ml，置于 100ml 容量瓶中，加蒸餾水定容至 100ml，混勻后待用，即為無機(jī)磷測(cè)定液。
5、磷加樣：按下表進(jìn)行操作，依次加入下列溶液，如果樣品中有無機(jī)磷，應(yīng)同時(shí)檢測(cè)無機(jī) 磷，并將無機(jī)磷扣除。
加入物(ml) | 標(biāo)準(zhǔn)管 | 無機(jī)磷測(cè)定管(選做) | 總磷測(cè)定管 |
系列濃度磷標(biāo)準(zhǔn)(0~8 號(hào)) | 1.5 | － | － |
無機(jī)磷測(cè)定液 | － | 1.5 | － |
總磷測(cè)定液 | － | － | 1.5 |
定磷試劑 | 1.5 | 1.5 | 1.5 |
6、磷測(cè)定：45℃孵育 10min，冷卻后以分光光度計(jì)測(cè)定 660nm 處標(biāo)準(zhǔn)管、無機(jī)磷測(cè)定管、總磷測(cè)定管的吸光度(分別記為A標(biāo)準(zhǔn)、A無機(jī)磷、A總磷)。
計(jì)算： 以磷含量(μg)(0~8 號(hào))為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)作圖，得標(biāo)準(zhǔn)曲線。以 A有機(jī)磷=A 總磷－A無機(jī)磷之差值，在標(biāo)準(zhǔn)曲線查的有機(jī)磷的質(zhì)量(μg)，再根據(jù)測(cè)定時(shí)取樣 ml 數(shù)，求得有機(jī)磷的質(zhì)量濃度(μg/ml)。
按下列公式計(jì)算樣品中核酸的質(zhì)量分?jǐn)?shù)：
核酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)(%)=CV×11/m×100%
式中：C=有機(jī)磷的質(zhì)量濃度(μg/ml)
V=樣品的總體積(ml)
11=1μg 磷相當(dāng)于 11μg 核酸
m=樣品質(zhì)量(μg)
1、 待測(cè)樣品如不能及時(shí)測(cè)定，應(yīng)置于 2~8℃保存，3 天內(nèi)穩(wěn)定。
2、 如果樣品濃度過高，應(yīng)用蒸餾水稀釋后重測(cè)，結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)。
3、 消化時(shí)間應(yīng)視樣品不同而不同，如果是 RNA 樣品，一般在 800W 電爐上消化 45min。
有效期： 6 個(gè)月有效。常溫運(yùn)輸，4℃保存。
當(dāng)前位置：
