ELISA測(cè)定的陽(yáng)性判斷值,通常是將大量陰性和陽(yáng)性人群的測(cè)定數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析后確定的,其確定依據(jù)為判斷結(jié)果的假陽(yáng)性和假陰性率低。在陽(yáng)性判斷值周?chē)欢ǚ秶鷥?nèi)之外的測(cè)定結(jié)果可歸為可疑,亦即ELISA測(cè)定的“灰區(qū)”。“灰區(qū)”的大小可用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法確定。測(cè)定結(jié)果處于“灰區(qū)”的樣本,可通過(guò)確認(rèn)試驗(yàn)或追蹤檢測(cè)來(lái)確定到底是陽(yáng)性還是陰性ELISA“灰區(qū)”是把定量分析的正常值范圍引入定性分析而建立的概念。
ELISA試劑盒在實(shí)際應(yīng)用的過(guò)程中，得通過(guò)不同的設(shè)計(jì)，不好走和方法都是有很多種類(lèi)的，像是接法、競(jìng)爭(zhēng)法、雙位點(diǎn)一步法、捕獲法測(cè)IgM抗體、應(yīng)用親和素和生物素的ELISA。今天小編就跟大家講講ELISA方法設(shè)計(jì)都有哪些原理？
ELISA試劑盒以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對(duì)底物的催化作用相結(jié)合起來(lái)的一種敏感性很高的試驗(yàn)技術(shù)。由于抗原、抗體的反應(yīng)在一種固相載體-聚苯乙烯微量滴定板的孔中進(jìn)行，每加入一種試劑孵育后，可通過(guò)洗滌除去多余的游離反應(yīng)物，從而保證試驗(yàn)結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性。
應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本水平。用純化的抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入，再與HRP標(biāo)記的抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB顯色。
ELISA試劑盒TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品的濃度?！?/div>
更新時(shí)間：2019-05-28
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