什么是
載體菌株呢？載體代表了新型表達(dá)載體，它具備所有廣受歡迎的克隆載體的理想特點(diǎn)和 T7 驅(qū)動(dòng)蛋白表達(dá)的*功能。目標(biāo)基因以相對(duì)于修飾的大腸桿菌 tet 啟動(dòng)子的反義方向插到 lacZ a - 肽編碼區(qū)，因此可進(jìn)行藍(lán) / 白斑篩選。正確定位于目標(biāo)基因正義方向上游的 T7 轉(zhuǎn)錄和翻譯信號(hào)使表達(dá)成為可能。與標(biāo)準(zhǔn) pET 載體一樣，通過(guò)轉(zhuǎn)化 λ DE3 溶原菌并用 IPTG 誘導(dǎo)或通過(guò) l CE6 感染原始宿主菌生產(chǎn)目標(biāo)蛋白。
你從載體map上看到的啟動(dòng)子終止子只是啟動(dòng)和終止目的基因表達(dá)的控制元件。而事實(shí)上質(zhì)粒復(fù)制以及質(zhì)粒功能的實(shí)現(xiàn)（比如說(shuō)抗性）都需要啟動(dòng)載體基因的表達(dá)，也就是說(shuō)，質(zhì)粒載體上除了你在看到的啟動(dòng)子，還有若干個(gè)質(zhì)粒結(jié)構(gòu)基因的啟動(dòng)子，只是這些啟動(dòng)子一般不需要人為控制，所以沒(méi)有體現(xiàn)在載體圖譜上。
在菌株中當(dāng)存在x-gal時(shí)產(chǎn)生白菌落表型，而帶有非重組載體的菌落變藍(lán)。由于T7驅(qū)動(dòng)的蛋白表達(dá)要求插入片段克隆到相對(duì)于tet啟動(dòng)子的反義方向，因此實(shí)際上沒(méi)有目標(biāo)序列的基礎(chǔ)表達(dá)。相對(duì)于pET載體，pETBlue質(zhì)粒上高拷貝PUC復(fù)制起點(diǎn)增加了質(zhì)粒產(chǎn)量，為測(cè)序、突變和其它質(zhì)粒操作帶來(lái)方便?？捎糜谠诎麧{中形成許多真核蛋白正確折迭和活性所要求的二硫鍵。低溫誘導(dǎo)也可增加可溶性目標(biāo)蛋白的比例。
更新時(shí)間：2021-02-24
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