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News CenterELISA在轉(zhuǎn)基因玉米檢測中的應用
玉米螟是玉米的主要害蟲之一,統(tǒng)計資料表明每年因玉米螟而造成的損失產(chǎn)量在5%左右。20試劑90年代以來,通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)將蘇云金桿菌的Bt毒蛋白基因?qū)胗衩锥@得的抗玉米螟雜交種已成為一種有效的防止玉米螟危害的方法。目前,在所有轉(zhuǎn)基因玉米品種中,Bt玉米的終止面積zui大效果,是大規(guī)模商業(yè)化的主要轉(zhuǎn)基因玉米品種。
中國專家應用純化的Bt1殺蟲晶體蛋白質(zhì)作為標準蛋白和免疫抗原,通過抗體-抗原-酶標抗體反應,建立了簡介酶聯(lián)免疫吸附測定法,對4中進口轉(zhuǎn)基因玉米實物樣品進行了測定。在實驗過程中首先通過建立的間接ELISA檢測方法對Bt1蛋白的顆粒比標準曲線、Bt1、蛋白質(zhì)質(zhì)量濃度標準曲線。根據(jù)間接ELISA法檢測得到的Bt1蛋白的顆粒比標準曲線與質(zhì)量您濃度標注曲線以及間接法測定的玉米實物樣品結(jié)果,可以換算得到樣品顆粒比結(jié)果與質(zhì)量弄對結(jié)果,并得到了免疫印證分析的驗證。同時在實驗中,還設(shè)立了陰性(NC,顆粒比0%)、陽性(pc、顆粒比0.15%)和空白(BC,提取液)3ge duizhao ,并與雙抗體夾心法做了比較,對照以及對比試驗結(jié)果一致,顯示應用該方法檢測玉米實物的結(jié)果是可靠的。與此同時,此種方法對Bt1蛋白質(zhì)的質(zhì)量濃度zui低可撿值為0.312ug/ml和顆粒比zui低可檢值為0.15%。該實驗中建立的簡介ELISA檢測方法不僅可以成功檢測處轉(zhuǎn)基因玉米種的Bt1蛋白,而且還具有由于試劑盒法的靈敏度,快速簡便,見底了檢測成本
部分專家采用了ELISA檢測法對轉(zhuǎn)基因抗蟲玉米品的4個生長發(fā)育時期的不同部位的Bt蛋白進行了定量分析。通過對樣品玉米在雄前,抽絲,灌漿初期和乳熟末期這四個時期的第10、15、21、頁及莖表皮,莖髓,雄穗小花,花粉,雄穗干,花絲,雌穗軸,雌穗柄,籽粒共12個部位的取樣,前處理后用進口ELISA試劑盒對標準Bt毒蛋白和樣品進行檢測,以標準Bt°蛋白濃度為縱坐標,以ELISA法測定的相對應OD450nm值為橫坐標,繪制標準曲線1以牛血清白蛋白BSA為標準利用考司馬亮藍G250法繪制OD450nm值歲標準可溶性蛋白BSA含量變化繪制標準曲線2將樣品測得OD450nm值帶入標準曲線1相對應的線性方程,便可以計算出代測樣品的Bt蛋白含量。通過與可溶性蛋白相比較,轉(zhuǎn)基因抗蟲玉米Bt毒蛋白站可溶性蛋白的比例,可以看出出花粉外,轉(zhuǎn)基因玉米的其他11個部位Bt毒蛋白含量比例隨著作物的生長周期的延伸呈上升趨勢。說明隨著Bt毒蛋白表達量的提高,玉米的抗蟲能力會不短增強。由于ELISA方法易受檢測環(huán)境的溫度和濕度等影響,所以在實驗中研究者選擇相同的實驗環(huán)境,并且通過建立標準曲線降低了系統(tǒng)的誤差。同時以陰性玉米材料(即不表達Bt毒蛋白)和空白為對照,未檢查Bt毒蛋白,也證實了實驗結(jié)果的可靠性。該實驗的Bt毒蛋白zui低檢出量為0.5ng/ml